p38 gamma MAPK12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400427-ACT

MAPK12 は、ストレスによって活性化されるマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MAPK）である p38γ をコードしており、細胞外からのシグナルをリン酸化依存的なプログラムへと統合し、転写制御、細胞骨格ダイナミクス、代謝適応を調節します。p38 MAPK シグナル伝達ネットワークの一員として、p38γ は炎症性サイトカインや環境ストレスに対する応答に関与し、下流における遺伝子発現やタンパク質分解・代謝回転の制御に影響を与えます。MAPK12 の活性は細胞分化や組織特異的シグナル伝達に関与するとされ、MAPK 経路のリワイヤリングが起こりやすいがん関連のシグナル伝達状況や炎症性表現型との関連も報告されています。これらの特性により、p38γ（MAPK12）は、ストレスシグナルと MAPK/ERK、NF-κB 関連プログラム、その他のキナーゼ駆動型制御回路とのクロストークを解析するための有用なノードとなります。

p38 gamma MAPK12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAPK12の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p38 gamma MAPK12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAPK12 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAPK12転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p38 gamma MAPK12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAPK12遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp38 gamma MAPK12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAPK12発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp38 gamma MAPK12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。