p38 beta MAPK11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400173-ACT

MAPK11は、p38 MAPKファミリーに属するストレス応答性のミトーゲン活性化プロテインキナーゼであるp38βをコードしており、炎症性サイトカイン、酸化ストレス、UV曝露などの細胞外シグナルを、リン酸化依存的なシグナル出力へと統合します。p38βは、MAPK活性化プロテインキナーゼや転写因子を含む下流基質を介して、サイトカイン産生、細胞周期チェックポイント、アポトーシス、分化を制御する転写プログラムおよび転写後制御を調節します。MAPK11の活性は自然免疫シグナル伝達と、NF-κB制御下の炎症やMAPKネットワーク間のクロストークと交差する、より広範なストレス応答経路に寄与します。p38シグナルの異常は、炎症性・神経変性プロセスや、文脈依存的に腫瘍生物学とも関連づけられており、経路の再配線やストレス適応の機構研究を後押ししています。

p38 beta MAPK11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAPK11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p38 beta MAPK11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAPK11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAPK11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p38 beta MAPK11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAPK11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp38 beta MAPK11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAPK11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp38 beta MAPK11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。