P2Y9 Double Nickaseプラスミド (m): sc-429620-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- P2Y9 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- P2Y9ダブルニカースプラスミド（m）およびP2Y9ダブルニカースプラスミド（m2）は、Lpar4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
P2Y9 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-429620-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスのLpar4は、リゾホスファチジン酸（LPA）受容体P2Y9をコードしており、細胞外LPAシグナルを三量体Gタンパク質へと連結し、ホスホリパーゼCの活性化、細胞内カルシウム動員、MAPK/ERKシグナル伝達などのセカンドメッセンジャーカスケードを制御するGPCRです。これらの経路を介してP2Y9は、細胞遊走、細胞骨格の再構築、増殖および生存プログラムに影響を与え、組織発生や炎症応答を形作ります。LPA–LPAR4シグナルはRhoファミリーGTPase活性とも連動し、細胞の状況に応じてcAMPを調節することもあり、受容体活性化をより広範な転写・代謝変化へと結び付けます。LPA受容体シグナルの破綻は、線維化、免疫機能異常、腫瘍関連の表現型と関連づけられており、Lpar4は微小環境に駆動されるシグナルの機序研究において重要な標的となります。
P2Y9 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Lpar4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Lpar4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Lpar4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Lpar4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。