P2Y12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417999

Panoramica

P2RY12 codifica il recettore purinergico P2Y12, un GPCR accoppiato a Gi che rileva l’ADP extracellulare per sopprimere la segnalazione mediata da cAMP e coordinare l’attivazione piastrinica, l’aggregazione e la stabilizzazione del trombo attraverso la segnalazione a valle PI3K/AKT e quella mediata dalle integrine. Oltre all’emostasi, P2Y12 è un marcatore caratteristico della microglia omeostatica e modula la chemiotassi, la motilità dei prolungamenti e la sorveglianza neuroimmune in risposta ai nucleotidi. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di P2RY12 sono state associate a una reattività piastrinica anomala e a cambiamenti dello stato microgliale osservati in contesti neuroinfiammatori e neurodegenerativi. Queste caratteristiche rendono P2RY12 un bersaglio utile per analizzare la segnalazione guidata dai nucleotidi, la comunicazione cellula-cellula e il crosstalk immuno-vascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO P2Y12 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene P2RY12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del P2RY12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto P2RY12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina P2Y12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di P2RY12 per lo studio della segnalazione di P2Y12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni P2RY12 critici per la funzione di P2Y12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di P2RY12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal P2Y12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal P2Y12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus P2RY12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal P2Y12 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR P2Y12 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia P2RY12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio P2RY12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.