P2Y1慢病毒激活颗粒(m): sc-422095-LAC
- 针对种属：mouse
- 200 µl 高滴度即用型CRISPR/dCas9慢病毒激活粒子
- P2Y1 慢病毒激活颗粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，通过细胞慢病毒转导，特异高效地上调目的基因的表达
- P2Y1慢病毒激活颗粒(m)包含以下SAM激活元素：一种是去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了转录活化域VP64；一种是MS2-p65-HSF1融合蛋白；一种是目标特定的20 nt向导RNA。它们还含有杀稻瘟菌素，潮霉素和嘌呤霉素抗性基因
- 一经转导，形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因，招募转录因子
- 由 P2Y1 慢病毒激活质粒 (m) 和 P2Y1 慢病毒激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 靶向 P2ry1 启动子的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因激活效率可以用抗体：P2Y1 Antibody (E-1): sc-377324，通过WB、IF或IHC分析
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P2Y1慢病毒激活颗粒(m) | sc-422095-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 P2ry1 基因编码嘌呤能 G 蛋白偶联受体 P2Y1。P2Y1 是细胞外 ADP 的主要感受器，主要与 Gq/11 蛋白偶联，从而激活磷脂酶 C（PLC），升高细胞内 Ca2+ 水平，并启动依赖 PKC 和 MAPK 的信号通路。P2Y1 参与血小板、内皮细胞、胶质细胞以及多种免疫与上皮细胞群体中的核苷酸介导的细胞间通讯，进而影响分泌、趋化、血管张力和突触调制。基于这些通路，P2Y1 常被用于研究血小板激活与血栓调控、神经炎症信号以及组织损伤应答等情境。涉及 P2Y1 的嘌呤能信号失调已被认为与炎症性及神经退行性疾病的机制相关，使得 P2ry1 成为解析 GPCR 与 Ca2+ 依赖性转录程序的一个有用节点。
P2Y1 慢病毒激活颗粒（m）通过将完整的协同激活介导体（SAM）转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中，满足了这一需求，从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 P2ry1 表达。
P2Y1 慢病毒激活颗粒（m）通过慢病毒转导递送协同激活介导体（SAM）系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂：一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9（D10A和N863A突变），并携带布拉西定抗性基因； 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂；以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA（与两个MS2 RNA适配体融合）并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后，SAM组分得以稳定表达，并在P2ry1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处，VP64、p65和HSF1协同作用，招募内源性转录 machinery，从而驱动内源性P2Y1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂，并保留原生的 P2ry1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势：稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活；高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要；且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性，扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选，以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。