P2X3 Double Nickaseプラスミド (m): sc-432763-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- P2X3 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- P2X3ダブルニカースプラスミド（m）およびP2X3ダブルニカースプラスミド（m2）は、P2rx3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: P2X3 抗体 (B-5): sc-390572
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
P2X3 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-432763-NIC | 20 µg | $410.00 |
P2rx3はP2X3受容体をコードしており、P2X3はATPによって開口する三量体の陽イオンチャネルです。末梢の感覚ニューロンに豊富に発現し、細胞外ヌクレオチドに応答して速い脱分極性電流を媒介します。P2X3の活性はCa2+およびNa+の流入を調節し、侵害受容性の神経伝達や神経原性炎症を形成するとともに、興奮性、シナプス伝達、感覚ニューロンの可塑性に影響するプリン作動性シグナル伝達ネットワークとも連携します。マウスモデルでは、P2rx3機能の変化が炎症性および神経障害性疼痛状態の基盤となる機序や、膀胱・気道反射に関わる内臓感覚経路と関連づけられています。この標的は、後根神経節、三叉神経ニューロン、ならびに関連する感覚回路におけるATP駆動性シグナル伝達を解析するために広く用いられています。
P2X3 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における P2rx3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、P2rx3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、P2rx3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、P2rx3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。