P2X1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404030-ACT

ヒトP2RX1は、ATP作動性の陽イオンチャネルP2X1をコードしており、P2X1は三量体のプリン作動性受容体です。細胞外ATPに迅速に応答して開口し、Na+およびCa2+の流入と膜の脱分極を介します。P2X1シグナルは、プリン作動性神経伝達、血小板活性化、白血球の走化性、平滑筋収縮に関与し、細胞外ヌクレオチドの放出を細胞内のカルシウム依存性経路へと結び付けます。カルシウム動態と興奮性の制御を通じて、P2X1は血管緊張、血栓—炎症反応、免疫細胞の活性化プログラムに影響を及ぼします。P2RX1/P2X1活性の変化は、血小板機能および血栓形成の生物学、炎症シグナル、ならびに生殖路生理などの文脈で研究されており、プリン作動性経路の機構解析に有用なノードとなっています。

P2X1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性P2RX1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

P2X1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における P2RX1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はP2RX1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性P2X1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のP2RX1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるP2X1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびP2RX1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるP2X1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。