P23 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402670-ACT

ヒトのPTGES3はp23をコードしており、p23は保存性の高いHSP90共シャペロンとして、クライアントタンパク質複合体を安定化し、ATPaseサイクルを調節することでタンパク質の成熟やシグナル伝達を支えます。p23はステロイドホルモン受容体のアセンブリと核内シグナル伝達の制御因子として最もよく知られていますが、細胞ストレス応答や転写制御に影響する、より広範なプロテオスタシス・ネットワークにも関与します。シャペロン依存性経路との統合を通じて、PTGES3は細胞増殖、分化、ならびにタンパク質毒性ストレスに対する適応応答に影響を及ぼし得ます。シャペロン／共シャペロンのバランス変化や受容体シグナルの破綻は、がんの生物学や炎症性シグナルなどの文脈を含む疾患関連表現型と関連づけられており、PTGES3は機序解明研究の有用なノードとなります。

P23 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTGES3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

P23 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTGES3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTGES3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性P23の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTGES3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるP23依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTGES3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるP23経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。