p14ARF/p16 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400018-LAC

CDKN2A は、細胞周期の進行を抑制し老化（senescence）プログラムを統合的に制御する 2 種類の腫瘍抑制タンパク質 p16INK4a と p14ARF をコードしており、これらは別々のリーディングフレーム（alternative reading frames）から産生されます。p16INK4a は CDK4/6 を阻害して RB1 を低リン酸化状態に保ち、E2F 依存的な S 期への進入を制限します。一方 p14ARF は MDM2 に拮抗することで TP53 を安定化させ、がん遺伝子ストレスに応答して細胞周期停止またはアポトーシスを促進します。これら RB 軸および p53 軸との連結を通じて、CDKN2A は増殖シグナル伝達をチェックポイント制御、DNA 損傷応答、加齢に関連する転写変化と統合します。CDKN2A の制御異常は、増殖の破綻、老化の障害、腫瘍形成性の表現型としばしば関連しており、がん生物学および細胞運命制御の機構研究における中心的なノードとなっています。

p14ARF/p16 レンチウイルス活性化粒子（h）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なCDKN2Aの発現上昇を可能にします。

p14ARF/p16 レンチウイルス活性化粒子（h）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、CDKN2A転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性p14ARF/p16の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のCDKN2Aゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。