Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p14ARF/p16 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400018-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- p14ARF/p16 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- p14ARF/p16ダブルニカースプラスミド（h）およびp14ARF/p16ダブルニカースプラスミド（h2）は、CDKN2Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: p14ARF 抗体 (ARF 4C6/4): sc-53392
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
p14ARF/p16 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400018-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p14ARF/p16 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400018-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN2Aは、細胞周期の進行とチェックポイント制御を異なる経路で制御する2つの腫瘍抑制タンパク質p16INK4Aおよびp14ARFをコードしています。p16はCDK4/6を阻害してRBのリン酸化を抑え、G1–S移行を制御します。一方、p14ARFはMDM2に拮抗してp53を安定化させ、がん遺伝子ストレスに応答した細胞周期停止または細胞老化を促進します。これらRBおよびp53ネットワークとの結び付きにより、CDKN2Aは増殖シグナルとゲノム監視を統合しており、悪性化の研究においてしばしば異常が見出されます。CDKN2Aの欠失やサイレンシングは、増殖制御の破綻、老化回避、ストレス応答シグナルの変化といった文脈で広く検討されています。
p14ARF/p16 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKN2A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKN2A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKN2Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKN2Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。