p14ARF/p16 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400018-ACT

CDKN2A は、がん遺伝子ストレスに応答したチェックポイント制御を協調して担う、2つの異なる腫瘍抑制タンパク質 p14ARF と p16INK4a をコードしています。p16INK4a は CDK4/6 を阻害して RB を低リン酸化状態に保ち、G1–S 期の進行を抑制します。一方、p14ARF は MDM2 に拮抗することで p53 シグナルを安定化させ、核小体ストレスをアポトーシスおよび細胞老化（セネッセンス）プログラムへと結び付けます。CDKN2A の発現変化や不活化は、細胞周期制御の破綻、老化誘導の障害、ゲノム不安定性と関連していることが多く、がん生物学において重要です。この遺伝子座はまた、細胞老化、増殖、ストレス誘導性の増殖停止を制御する経路をモデル化する目的でも広く用いられています。

p14ARF/p16 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDKN2Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p14ARF/p16 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDKN2A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDKN2A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p14ARF/p16の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDKN2A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp14ARF/p16依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDKN2A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp14ARF/p16経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。