p115 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403918-ACT

USO1は、小胞のテザリング因子p115をコードしており、ベシクルコートとゴルジマトリックス成分およびSNARE機構を橋渡しすることで、ER（小胞体）からゴルジ体への輸送およびゴルジ体内輸送を協調的に制御する、保存性の高いコイルドコイルタンパク質です。p115はゴルジ体構造の維持、方向性のある膜輸送、ならびに分泌経路の恒常性を支え、その結果としてタンパク質のプロセシングや細胞表面への輸送に影響します。USO1に関連する輸送が乱れると、プロテオスタシス、ストレス応答、そして制御された分泌や膜受容体のターンオーバーに依存するシグナル出力に影響が及ぶ可能性があります。小胞輸送やゴルジ体の組織化の破綻は、がん化（腫瘍性形質転換）や神経変性様の表現型としばしば関連するため、USO1は分泌機能不全が経路レベルで及ぼす影響を検討するうえで有用な結節点となります。

p115 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p115 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p115の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp115依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp115経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。