OX2R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404121-ACT

O CD200R1 humano codifica o imunorreceptor inibitório OX2R, um receptor de checkpoint da linhagem mieloide que se liga ao CD200 para conter a ativação inflamatória. A sinalização do OX2R atenua a produção de citocinas e a maturação de células apresentadoras de antígeno por meio de vias inibitórias dependentes de fosforilação que convergem para a redução da atividade de MAPK e NF-κB, modulando a comunicação entre a imunidade inata e a adaptativa. Esse eixo está implicado na regulação da homeostase de micróglias e das respostas de macrófagos periféricos, com relevância para a evasão imune e para estados inflamatórios crônicos observados no câncer, em condições autoimunes e em modelos de doenças neuroinflamatórias. Como resultado, o CD200R1 é frequentemente estudado em vias que controlam a tolerância imunológica, as respostas a dano tecidual e os fenótipos mieloides associados a tumores.

OX2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD200R1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OX2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD200R1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD200R1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OX2R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD200R1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OX2R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OX2R em células tumorais com expressão de CD200R1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.