OTUD7B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403268-ACT

ヒトのOTUD7Bは、ユビキチン鎖を切断してタンパク質の安定性やシグナル伝達の強度を精密に調節する、脱ユビキチン化酵素（OTUドメイン含有）をコードしています。OTUD7Bは、NF-κBおよび関連する受容体近傍のシグナル伝達複合体のユビキチン依存的制御を含む、免疫・炎症経路の調節に関与することが示されており、その結果として下流の転写プログラムの形成に影響を与えます。ユビキチン動態への作用を介して、OTUD7Bはシグナル終結、ストレス応答、プロテオスタシスなどの細胞過程にも影響します。OTUD7Bの活性や発現が破綻すると、免疫シグナルの変化やがんに関連する表現型と結び付くことが報告されており、ユビキチン介在性制御の機構研究における有用な結節点（ノード）となります。

OTUD7B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OTUD7Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OTUD7B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OTUD7B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOTUD7B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OTUD7Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOTUD7B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOTUD7B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOTUD7B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOTUD7B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。