Plasmide CRISPR d'Activation (h) OSMR β: sc-402700-ACT

L’OSMR humain code la sous-unité β du récepteur de l’oncostatine M, un composant de transduction du signal appartenant à la famille des récepteurs de cytokines de type I, qui s’associe à gp130 pour médiater les réponses à l’oncostatine M et aux cytokines apparentées de la famille de l’IL‑6. La liaison du ligand active la signalisation JAK/STAT, avec un couplage supplémentaire aux voies MAPK et PI3K/AKT, qui régulent l’expression de gènes inflammatoires, les programmes épithélio‑mésenchymateux, le remodelage de la matrice extracellulaire et la survie cellulaire. L’activité d’OSMRβ a été associée à des modifications dépendantes du contexte dans les interactions entre stroma et système immunitaire, les processus de réparation tissulaire, ainsi qu’à des phénotypes fibrosants ou inflammatoires dans de nombreux tissus. Une signalisation dérégulée de la voie OSMR est fréquemment étudiée pour son implication dans l’inflammation chronique et les mécanismes pathologiques dépendants du microenvironnement.

OSMR β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OSMR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OSMR β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OSMR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OSMR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OSMR β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OSMR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OSMR β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OSMR β dans les cellules tumorales présentant une expression de OSMR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.