Orai1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400901-ACT

ORAI1 は、小胞体の Ca²⁺ 枯渇後にストア作動性カルシウム流入（SOCE）を媒介するカルシウム放出活性化カルシウム（CRAC）チャネルの、孔形成サブユニットである Orai1 をコードする。持続的な Ca²⁺ 流入を可能にすることで、Orai1 は NFAT シグナル伝達などの下流の Ca²⁺ 依存性転写プログラムを制御し、リンパ球の活性化、サイトカイン産生、ならびにより広範な免疫細胞のエフェクター機能を規定する。ORAI1 の活性はまた、Ca²⁺ 感受性経路およびイオン恒常性ネットワークを介して、複数の細胞種における増殖・遊走・分泌にも影響する。ORAI1/SOCE シグナルの破綻は免疫機能異常の表現型や炎症性病態生理と関連づけられており、細胞内シグナル伝達研究における機構的ノードとしての有用性を支持している。

Orai1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ORAI1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Orai1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ORAI1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はORAI1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Orai1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のORAI1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOrai1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびORAI1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOrai1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。