Optineurin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401851-ACT

OPTN codifica a optineurina, uma proteína adaptadora multifuncional que coordena a autofagia seletiva, o tráfego vesicular e a sinalização imune inata. A optineurina liga-se a cargas ubiquitinadas e à maquinaria de autofagia para sustentar a mitofagia e a xenofagia, e interage com vias dependentes de NF-κB e TBK1 que regulam respostas inflamatórias. No sistema endocítico, a optineurina contribui para a dinâmica de membranas e o tráfego de receptores por meio de interações com GTPases Rab e componentes do citoesqueleto. Perturbações genéticas ou alterações na expressão de OPTN têm sido associadas a fenótipos neurodegenerativos e oculares, incluindo esclerose lateral amiotrófica e glaucoma, tornando-o um alvo valioso para estudos mecanísticos de proteostase e inflamação.

Optineurin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OPTN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Optineurin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OPTN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OPTN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Optineurin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OPTN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Optineurin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Optineurin em células tumorais com expressão de OPTN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.