OPN1MW2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418725-ACT

OPN1MW2は、中波長に感受性をもつ錐体オプシンをコードしており、網膜の錐体視細胞で発現します。そこで11-cis-レチナールと結合して、光によって活性化されるGPCRを形成し、視覚の光情報伝達（フォトトランスダクション）を開始します。光子を吸収すると、活性化したオプシンはトランスデューシン（GNAT2）と共役し、ホスホジエステラーゼ活性を介してcGMP濃度を調節します。これによりcGMP依存性チャネルが閉鎖し、錐体が過分極します。この経路は、錐体シグナルの精密な調節と順応を通じて、色の識別や昼間視における視力を支えます。OPN1MW遺伝子クラスター内の多様性は、遺伝性の色覚異常や分光感度の変化と関連しており、OPN1MW2は網膜生物学における遺伝子型—表現型関係の研究に重要です。

OPN1MW2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OPN1MW2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OPN1MW2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OPN1MW2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOPN1MW2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OPN1MW2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOPN1MW2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOPN1MW2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOPN1MW2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOPN1MW2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。