OLFML3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404425

Panoramica

OLFML3 (olfactomedin-like 3) codifica una glicoproteina secreta associata alla matrice extracellulare, appartenente alla famiglia delle olfactomedine, coinvolta nelle interazioni cellula–matrice e nel rimodellamento tissutale. È espressa in contesti stromali e vascolari ed è stata collegata alla regolazione di programmi angiogenici, a comportamenti di tipo fibroblastico e alla modulazione di microambienti infiammatori tramite effetti sui segnali extracellulari. L’attività di OLFML3 interseca vie che governano l’organizzazione della matrice extracellulare, la migrazione cellulare e il crosstalk endotelio–stroma, processi spesso alterati durante la progressione tumorale e il rimodellamento fibrotico. Un’espressione deregolata di OLFML3 è stata riportata in molteplici tumori e patologie associate al comparto vascolare, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico per lo studio di fenotipi guidati dal microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OLFML3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OLFML3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OLFML3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OLFML3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OLFML3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OLFML3 per lo studio della segnalazione di OLFML3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OLFML3 critici per la funzione di OLFML3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OLFML3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OLFML3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OLFML3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OLFML3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OLFML3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OLFML3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OLFML3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OLFML3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.