OCTN1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403258-ACT

SLC22A4は、ヒトの有機カチオン／カルニチントランスポーターOCTN1をコードしており、血漿膜を介した小分子カチオン性代謝産物の細胞内取り込みおよび排出を制御する、多基質性の溶質キャリアです。OCTN1は、エルゴチオネインや関連する有機カチオンなどの基質を輸送することで、栄養素の取り扱いとレドックス恒常性に寄与し、細胞内の抗酸化能や代謝適応に影響を与えます。これらの輸送活性を通じて、SLC22A4は上皮バリア機能、免疫細胞の生理、異物動態を規定する膜輸送ネットワークと交差します。SLC22A4の遺伝的多型や発現変動は、文献において炎症性・自己免疫性の表現型や細胞ストレス応答の変化と関連づけられており、免疫代謝および上皮生物学における機序研究での重要性を支持しています。

OCTN1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC22A4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OCTN1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC22A4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC22A4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OCTN1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC22A4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOCTN1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC22A4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOCTN1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。