Ob Double Nickaseプラスミド (h): sc-400706-NIC

ヒトLEPはレプチン（Ob）をコードしており、レプチンは分泌性のアディポカインとして、栄養状態の情報を末梢組織および中枢神経系に伝達し、食欲、エネルギー消費、神経内分泌機能の調節に関与します。レプチンシグナル伝達は主に、LEPR依存性のJAK2/STAT3、PI3K–AKT、MAPKカスケードを介して行われ、インスリン経路や炎症性経路とも統合されることで、代謝恒常性の協調的な制御に寄与します。LEPの発現やシグナル伝達の破綻は、脂肪量、インスリン感受性、免疫調節の変化と関連し、肥満に関連する心代謝表現型の文脈で広く研究されています。さらにLEP/Obは造血、T細胞の極性化、サイトカインネットワークにも影響を及ぼし、免疫代謝や全身性炎症に関する研究を支えています。

Ob ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LEP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LEP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LEPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LEPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。