OB-cadherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401051

Panoramica

CDH11 codifica per la OB-caderina, una caderina classica che media l’adesione cellula–cellula omofilica dipendente dal calcio e contribuisce all’architettura tissutale e alla segnalazione intercellulare. Attraverso interazioni con le catenine, la OB-caderina collega le giunzioni aderenti al citoscheletro di actina e influenza vie che regolano la polarità cellulare, la migrazione e la meccanotrasduzione, inclusa la regolazione della disponibilità di β-catenina e il rimodellamento giunzionale. CDH11 è fortemente espresso nelle linee mesenchimali e nei compartimenti stromali, dove supporta l’organizzazione della matrice extracellulare e i programmi di motilità cellulare. Un’espressione deregolata di CDH11 è stata associata a rimodellamento fibrotico, patologie infiammatorie articolari e interazioni tumore–stroma rilevanti per l’invasione e la formazione della nicchia metastatica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OB-cadherin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDH11 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDH11 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDH11 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OB-cadherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDH11 per lo studio della segnalazione di OB-cadherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDH11 critici per la funzione di OB-cadherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDH11 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OB-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OB-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDH11. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OB-cadherin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OB-cadherin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDH11 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDH11 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.