Plásmido CRISPR de Activación (h) OATP-H: sc-404706-ACT

El SLCO4C1 humano codifica OATP-H, un polipéptido transportador de aniones orgánicos de la superfamilia de transportadores solutos (SLC) que media la captación independiente de sodio de diversos metabolitos endógenos y compuestos de tipo xenobiótico a través de las membranas celulares. Al regular la entrada celular y la distribución de aniones orgánicos anfipáticos, OATP-H contribuye a la homeostasis metabólica impulsada por transportadores e influye en la exposición de los tejidos a pequeñas moléculas circulantes. Los patrones de expresión de SLCO4C1 y la actividad del transportador se cruzan con vías que gobiernan la desintoxicación, las respuestas al estrés celular y el manejo farmacocinético en contextos de barrera y excreción. La alteración de la regulación de SLCO4C1 se ha investigado en relación con fenotipos renales y cardiometabólicos y como modificador de la susceptibilidad específica de tejido a estresores químicos e inflamatorios.

OATP-H El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLCO4C1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OATP-H El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLCO4C1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLCO4C1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OATP-H. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLCO4C1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OATP-H en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OATP-H en células tumorales con expresión de SLCO4C1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.