OATP-CCRISPR激活质粒(h): sc-402898-ACT

SLCO1B1 编码人有机阴离子转运多肽 OATP-C（OATP1B1）。该转运体为多特异性摄取转运蛋白，主要富集于肝细胞，介导胆汁酸、胆红素结合物、类固醇激素代谢物、甲状腺激素以及多种外源性化合物在不依赖钠离子的情况下进入细胞。通过调控这些物质从肝窦侧进入肝细胞的摄取过程，OATP-C 会影响肝脏清除、肠肝循环以及内源代谢物和小分子底物在全身的暴露水平。SLCO1B1 的活性与解毒与代谢通路相互交织，并与 I/II 相代谢酶及 ABC 外排转运体协同作用，从而在药代动力学网络中塑造“转运体–酶”之间的相互影响。其基因变异或表达失调与药物处置改变及转运体介导的不良反应易感性相关，并常在肝功能、高胆红素血症以及药物–药物相互作用机制等研究背景下被关注。

OATP-C CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLCO1B1的表达。

OATP-C CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLCO1B1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLCO1B1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性OATP-C表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLCO1B1位点，并能够研究内源性位点上依赖于OATP-C的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLCO1B1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟OATP-C通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。