OAT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403923-ACT

SLC22A7は、ヒト有機アニオントランスポーター2（OAT2）をコードしており、内因性の有機アニオンや外来性化合物（ゼノバイオティクス）代謝産物の細胞内取り込みおよび交換を担う、多基質特異性のソルートキャリアです。OAT2の活性は小分子の肝・腎での取り扱いに寄与し、協調的に働くトランスポーターネットワークを介して、細胞内アニオンバランスの調節や代謝・解毒プロセスとの連関に影響を与えます。薬剤様化合物や代謝中間体に対する細胞の曝露を規定することで、OAT2は薬物動態、トランスポーター介在性の薬物体内動態（薬物処理）、および組織特異的な化学物質感受性の個体差に関する研究において重要です。そのため、トランスポーター発現や機能の破綻は、肝臓・腎臓の生理や、疾患に伴うゼノバイオティクスクリアランス経路の変化を解明する機構研究において関心の対象となります。

OAT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC22A7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OAT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC22A7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC22A7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OAT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC22A7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOAT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC22A7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOAT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。