OAT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404284-ACT

ヒトSLC22A6は有機アニオントランスポーター1（OAT1）をコードしており、腎近位尿細管の上皮細胞基底膜側に存在するトランスポーターとして、血液中の内因性代謝物および外因性の有機アニオン（ゼノバイオティクス）を上皮細胞内へ取り込む働きを担う。OAT1は、有機アニオン交換を尿酸、尿毒素、薬物抱合体の細胞内処理と連動させるソルートキャリア（SLC）ネットワークの中で機能し、腎分泌および全身クリアランスを規定する。代謝物や医薬品に対する細胞内曝露に影響することで、SLC22A6の活性は尿細管ストレス応答や輸送依存的な毒性学に関連する経路とも交差する。OAT1の発現や機能の変化は、実験モデルにおいて薬物動態の個体差や腎関連の有害反応に対する感受性の違いと関連づけられており、腎臓学および薬物動態研究における重要性を支持している。

OAT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC22A6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OAT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC22A6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC22A6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OAT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC22A6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOAT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC22A6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOAT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。