Nur77 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420884-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Nur77O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Nur77 (m) e o Plasmídeo Double Nickase Nur77 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Nr4a1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Nur77 Anticorpo (C-5): sc-365113
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Nur77 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-420884-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nur77 Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-420884-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O Nr4a1 murino codifica o receptor nuclear órfão Nur77 (NR4A1), um fator de transcrição de resposta imediata (immediate-early) que integra sinais da ativação do receptor de células T, das cascatas de MAPK e de programas inflamatórios ligados ao NF-κB. O Nur77 regula redes gênicas que controlam a seleção negativa de timócitos, a anergia de células T periféricas, a polarização de macrófagos e a adaptação metabólica, com efeitos dependentes do contexto sobre a apoptose e vias mitocondriais. No sistema nervoso, é rapidamente induzido pela atividade neuronal e por hormônios do estresse, conectando a sinalização dependente de cálcio a respostas transcricionais. A desregulação da sinalização de NR4A1 tem sido implicada em modelos de autoimunidade e inflamação crônica, aterosclerose, programas de sobrevivência de células cancerosas e processos neuroinflamatórios e neurodegenerativos.
Nur77 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Nr4a1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Nr4a1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Nr4a1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Nr4a1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.