NUDT5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424768-ACT

O gene **Nudt5** de camundongo codifica a **NUDT5**, uma hidrolase Nudix que regula a homeostase de metabólitos de nucleotídeos ao hidrolisar a **ADP-ribose** e derivados relacionados, influenciando assim a disponibilidade de substratos para a **ADP-ribosilação** e a sinalização a jusante. Ao controlar os “pools” de nucleotídeos e o turnover de ADP-ribose, a NUDT5 se conecta a processos ligados às respostas a danos no DNA, à regulação da cromatina e à adaptação ao estresse celular. Alterações no metabolismo de ADP-ribose têm sido associadas à proliferação desregulada e a vias de manutenção do genoma, tornando o **Nudt5** um alvo relevante para estudos mecanísticos em biologia do câncer e em outros distúrbios que envolvem reparo de DNA comprometido e reprogramação metabólica. Em modelos murinos, a perturbação de **Nudt5** permite investigar como a sinalização por nucleotídeos influencia programas transcricionais e transições de estado celular.

NUDT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nudt5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NUDT5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nudt5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nudt5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NUDT5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nudt5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NUDT5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NUDT5 em células tumorais com expressão de Nudt5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.