Plásmido CRISPR de Activación (h) NUDT21: sc-402082-ACT

NUDT21 humana codifica un componente central del complejo factor de corte Im (CFIm), que reconoce elementos UGUA en el pre-ARNm y favorece el procesamiento del extremo 3′ y la elección del sitio de poli(A). Al regular la poliadenilación alternativa, NUDT21 determina la longitud de la UTR 3′, la estabilidad del transcrito, su localización y el control de la traducción, influyendo así en programas globales de expresión génica. Esta función de procesamiento de ARN vincula a NUDT21 con vías que gobiernan el control del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés mediante la modulación coordinada del uso de isoformas de ARNm. La actividad desregulada de CFIm y los patrones alterados de poliadenilación alternativa en los que participa NUDT21 se han asociado con remodelación transcripcional relevante para la enfermedad en cáncer y con fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación postranscripcional.

NUDT21 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NUDT21 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NUDT21 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NUDT21 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NUDT21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NUDT21. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NUDT21 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NUDT21 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NUDT21 en células tumorales con expresión de NUDT21 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.