NUAK1/ARK5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429607

Panoramica

Nuak1 codifica NUAK1/ARK5, una chinasi serina/treonina della famiglia delle chinasi correlate ad AMPK, che collega lo stato energetico cellulare a programmi adattativi che controllano sopravvivenza, polarità, adesione e rimodellamento del citoscheletro. La segnalazione di NUAK1 è stata associata alla regolazione dell’attività della fosfatasi della miosina, a cascate di chinasi sensibili allo stress e al coordinamento delle risposte metaboliche in condizioni di limitata disponibilità di nutrienti. Nei sistemi murini, l’attività di NUAK1/ARK5 viene utilizzata per studiare come le vie di sensing energetico si interfacciano con migrazione, comportamenti di tipo invasivo e resistenza all’apoptosi indotta da stress. Una funzione disregolata di NUAK1/ARK5 è stata implicata in fenotipi oncogenici e metabolici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in modelli di biologia tumorale e di stress cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NUAK1/ARK5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nuak1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nuak1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nuak1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NUAK1/ARK5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nuak1 per lo studio della segnalazione di NUAK1/ARK5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nuak1 critici per la funzione di NUAK1/ARK5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nuak1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nuak1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NUAK1/ARK5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NUAK1/ARK5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nuak1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nuak1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.