NTR2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405783

Panoramica

Il recettore della neurotensina 2 (NTSR2, NTR2) è un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) di classe A che lega il neuropeptide neurotensina e si accoppia prevalentemente a Gαq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la mobilizzazione del calcio intracellulare e cascate di chinasi a valle come PKC–MAPK/ERK. La segnalazione mediata da NTR2 influenza l’eccitabilità neuronale, la trasmissione sinaptica e le risposte neuroendocrine, e può modulare il crosstalk con le vie della dopamina e del glutammato che plasmano l’attività dei circuiti neurali. In contesti non neuronali, l’espressione di NTSR2 è stata associata alla segnalazione infiammatoria e alle risposte allo stress cellulare, a sostegno della sua rilevanza per studi su neuroinfiammazione e rimodellamento tissutale. Un’alterata regolazione dell’asse neurotensina–NTR2 è stata investigata nella biologia delle malattie neurologiche e neuropsichiatriche e nei meccanismi che contribuiscono a modifiche della proliferazione e della sopravvivenza cellulare in modelli associati a patologie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NTR2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NTSR2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NTSR2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NTSR2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NTR2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NTSR2 per lo studio della segnalazione di NTR2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NTSR2 critici per la funzione di NTR2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NTSR2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NTR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NTR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NTSR2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NTR2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NTR2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NTSR2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NTSR2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.