Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NT-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402291
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NT-4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NT-4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NT-4 Antibody (C-1): sc-365444
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NT-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402291 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
L’NTF4 umano codifica la neurotrofina-4 (NT-4), un fattore di crescita secreto appartenente alla famiglia delle neurotrofine che segnala principalmente attraverso il recettore TrkB (NTRK2) per attivare le vie MAPK/ERK, PI3K/AKT e PLCγ. NT-4 supporta la sopravvivenza neuronale, la crescita dei neuriti, la plasticità sinaptica e il mantenimento dei circuiti dipendente dall’attività, con ulteriori ruoli riportati nei sistemi sensoriali e nell’innervazione periferica. Una deregolazione della segnalazione neurotrofina–TrkB è implicata nella neurodegenerazione, in fenotipi del neurosviluppo e in alterazioni della funzione sinaptica, rendendo NTF4 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla connettività neuronale e sul supporto trofico. L’espressione di NTF4 e l’attività della via NT-4/TrkB vengono inoltre studiate in modelli di risposta al danno e di rimodellamento cellulare associato allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NT-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NTF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NTF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NTF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NT-4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NTF4 per lo studio della segnalazione di NT-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni NTF4 critici per la funzione di NT-4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NTF4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NT-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NT-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NTF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NT-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NT-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NTF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NTF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.