Plásmido CRISPR de Activación (m) NT-3: sc-421978-ACT

El gen **Ntf3** de ratón codifica la **neurotrofina‑3 (NT‑3)**, un factor de crecimiento secretado que regula la supervivencia neuronal, la diferenciación y la conectividad sináptica durante el desarrollo y en tejidos adultos. La NT‑3 señaliza principalmente a través del receptor tirosina cinasa **TRKC/NTRK3** para activar las cascadas **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** y **PLCγ**, que determinan la guía axonal, el crecimiento de neuritas y la plasticidad dependiente de la actividad. Más allá del sistema nervioso, la NT‑3 influye en la formación de circuitos propioceptivos y en el mantenimiento de nervios periféricos, y puede modular las interacciones neuroinmunes dentro de los microambientes tisulares. La desregulación de la señalización por neurotrofinas es relevante en estudios de fenotipos del neurodesarrollo, neurodegeneración y respuestas a lesiones nerviosas, donde el soporte trófico alterado y el equilibrio de las vías del receptor afectan el destino celular y la conectividad.

NT-3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ntf3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NT-3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ntf3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ntf3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NT-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ntf3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NT-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NT-3 en células tumorales con expresión de Ntf3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.