NSP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407380

Panoramica

SH2D3C codifica NSP3, una proteina adattatrice citosolica contenente domini SH2 e SH3 che aiuta ad accoppiare i recettori fosforilati su tirosina ai complessi di segnalazione a valle. NSP3 partecipa a vie che regolano il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione integrino-dipendente e la trasduzione del segnale mediata da recettori, influenzando la migrazione cellulare e comportamenti cellulari legati al sistema immunitario. Attraverso interazioni con chinasi e proteine scaffold, può modulare MAPK e altre reti dipendenti dalla fosfotirosina che determinano le soglie di attivazione e i programmi di motilità cellulare. Una segnalazione adattatrice disregolata e fenotipi alterati di adesione/migrazione sono spesso implicati nella biologia dell’infiammazione e in processi associati al cancro, rendendo SH2D3C un bersaglio utile per studi meccanicistici dei circuiti di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NSP3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SH2D3C in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SH2D3C insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SH2D3C a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NSP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SH2D3C per lo studio della segnalazione di NSP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SH2D3C critici per la funzione di NSP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SH2D3C per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NSP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NSP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SH2D3C. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NSP3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NSP3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SH2D3C per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SH2D3C definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.