Nrl CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402610-ACT

NRL（neural retina leucine zipper）は転写因子Nrlをコードしており、Nrlは光受容体の発生と杆体細胞としてのアイデンティティ確立に中心的な役割を担う、塩基性ロイシンジッパー（bZIP）型の転写制御因子です。Nrlはシス制御配列に結合し、他の網膜因子と協調して転写ネットワークを統合することで、光受容（フォトトランスダクション）、外節形成、分化ニューロンにおける代謝恒常性に関わるプログラムを制御します。NRL関連の遺伝子発現制御の破綻は、遺伝性網膜疾患や光受容体機能障害と関連しており、NRLは網膜生物学における遺伝子制御回路を研究する上で有用な結節点となります。したがってヒトNrlの活性は、網膜における神経分化、細胞運命決定、転写制御の研究において重要です。

Nrl CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NRLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nrl CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NRL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNRL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nrlの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNRL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNrl依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNRL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNrl経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。