Nrf2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421869-ACT

O gene Nfe2l2 de camundongo codifica o fator de transcrição Nrf2, um regulador mestre da homeostase redox celular e da defesa contra xenobióticos. Sob estresse oxidativo ou eletrofílico, o Nrf2 se acumula e promove a transcrição a partir de elementos de resposta antioxidante (AREs), induzindo genes envolvidos no metabolismo da glutationa, na regeneração de NADPH e em enzimas de desintoxicação de fase II. Essa via se integra à proteostase, à função mitocondrial e à sinalização inflamatória, moldando as respostas celulares a tóxicos ambientais e ao estresse metabólico. A atividade desregulada de Nrf2 tem sido associada a suscetibilidade alterada a lesão oxidativa e inflamação, tornando o Nfe2l2 um alvo amplamente usado para modelar mecanismos de adaptação ao estresse em sistemas relevantes para doenças.

Nrf2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nfe2l2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nrf2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nfe2l2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nfe2l2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nrf2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nfe2l2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nrf2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nrf2 em células tumorais com expressão de Nfe2l2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.