NR2E1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423422-ACT

Nr2e1 kodiert NR2E1 (TLX), einen verwaisten nukleären Rezeptor-Transkriptionsfaktor, der die Selbsterneuerung neuraler Stamm- und Vorläuferzellen aufrechterhält und während der Vorderhirnentwicklung das Gleichgewicht zwischen Proliferation und Differenzierung reguliert. NR2E1 integriert Transkriptionsprogramme, die den Zellzyklus, die Neurogenese und die chromatinabhängige Genrepression steuern, und beeinflusst dadurch die kortikale Musterbildung sowie die Netzhautentwicklung. In Mausmodellen ist eine veränderte Nr2e1-Aktivität mit neuroentwicklungsbedingten Phänotypen verbunden, die Gehirnstruktur und Verhalten betreffen, was seine Relevanz für Signalwege unterstreicht, die die Spezifizierung neuraler Zelllinien kontrollieren. Dieses Gen wird daher häufig genutzt, um regulatorische Netzwerke zu untersuchen, die der Erhaltung von Stammzellen, der neuronalen Reifung und der gewebespezifischen Transkriptionskontrolle zugrunde liegen.

NR2E1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nr2e1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NR2E1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nr2e1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nr2e1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NR2E1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nr2e1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NR2E1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NR2E1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nr2e1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.