NPR-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401737-ACT

O NPR1 humano codifica o receptor do peptídeo natriurético A (NPR-A), uma guanilil ciclase transmembranar de passagem única que se liga aos peptídeos natriuréticos atrial e cerebral para gerar cGMP. A sinalização via NPR-A ativa efetores dependentes de cGMP, como a PKG, e modula o transporte iônico, o tônus vasodilatador e programas transcricionais que regulam a homeostase cardiovascular e renal. Por meio do turnover do cGMP e do cross-talk com as vias do óxido nítrico e das fosfodiesterases, o NPR1 influencia respostas de crescimento celular e a remodelação da matriz extracelular. Alterações na atividade de NPR1/NPR-A têm sido associadas à desregulação do controle da pressão arterial, à hipertrofia cardíaca e à fisiopatologia cardiorrenal, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos da sinalização cardiometabólica.

NPR-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NPR-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NPR-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NPR-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NPR-A em células tumorais com expressão de NPR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.