NPR-A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401737-ACT

Il gene umano **NPR1** codifica il recettore A dei peptidi natriuretici (**NPR-A**), una guanilil ciclasi transmembrana a singolo passaggio che lega i peptidi natriuretici atriale e cerebrale per generare **cGMP**. La segnalazione mediata da NPR-A attiva effettori dipendenti dal cGMP, come **PKG**, e modula il trasporto ionico, il tono vasodilatatorio e programmi trascrizionali che regolano l’omeostasi cardiovascolare e renale. Attraverso il turnover del cGMP e il cross-talk con le vie dell’ossido nitrico e delle fosfodiesterasi, **NPR1** influenza le risposte di crescita cellulare e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’alterata attività di **NPR1/NPR-A** è stata associata a una regolazione disfunzionale della pressione arteriosa, ipertrofia cardiaca e fisiopatologia cardiorenale, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della segnalazione cardiometabolica.

NPR-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NPR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NPR-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NPR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NPR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NPR-A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NPR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NPR-A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NPR-A nelle cellule tumorali con espressione di NPR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.