NPDC-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412710

Panoramica

NPDC1 (proteina 1 della proliferazione, differenziazione e controllo neurale) codifica NPDC-1, una proteina citoplasmatica arricchita in contesti neuronali e collegata alla regolazione della progressione del ciclo cellulare e dei programmi di differenziazione. È stato riportato che NPDC-1 moduli reti trascrizionali attraverso interazioni con recettori nucleari e altri fattori regolatori, influenzando così le transizioni dalla proliferazione alla differenziazione e fenotipi associati ai neuriti. In linea con questi ruoli, un’espressione alterata di NPDC1 è stata associata a cambiamenti nel controllo della crescita e negli stati di maturazione cellulare in modelli rilevanti per la neurobiologia. NPDC1 viene pertanto studiato nelle vie che governano la limitazione del ciclo cellulare, l’impegno di linea e la regolazione della crescita dipendente dal contesto, con implicazioni per la ricerca sul neurosviluppo e sulla biologia dei tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NPDC-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NPDC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NPDC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NPDC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NPDC-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NPDC1 per lo studio della segnalazione di NPDC-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NPDC1 critici per la funzione di NPDC-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NPDC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NPDC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NPDC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NPDC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NPDC-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NPDC-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NPDC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NPDC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.