NPC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402010-ACT

ヒトNPC2は、可溶性のリソソーム内コレステロール結合タンパク質をコードしており、NPC1と協調して、後期エンドソーム／リソソームから未エステル化コレステロールおよび他の脂質を動員し、下流の輸送経路へと送り出します。NPC2の活性は、コレステロールの排出と小胞体および細胞膜への分配を制御することで、細胞内ステロール恒常性、膜組成、ならびに脂質依存的なシグナル伝達を支えます。NPC2依存的な輸送が破綻すると、リソソーム内に脂質が蓄積してエンドリソソーム機能が攪乱され、NPC2はニーマン・ピック病C型2（NPC2）に加え、神経変性や代謝機能障害に関わるより広範な経路とも関連づけられます。細胞内脂質トラフィッキングの中核因子として、NPC2はオートファジー‐リソソーム動態、小胞輸送、ならびにコレステロール制御性の遺伝子発現プログラムを司る機構の研究で頻繁に解析されています。

NPC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NPC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NPC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NPC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNPC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NPC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNPC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNPC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNPC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNPC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。