Nova-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404452-NIC

NOVA2はNova-2（神経細胞に豊富に発現するRNA結合タンパク質）をコードしており、YCAYモチーフを認識して、シナプス機能や神経成熟に関わる転写産物の選択的スプライシング、mRNAの安定性、局在を制御する。pre-mRNAプロセシングの調節を通じて、Nova-2は活動依存的な遺伝子発現プログラムの形成に寄与し、軸索誘導、シナプス形成、神経伝達に関連する経路の正確性を支える。NOVA2依存的なスプライシングネットワークの攪乱は、神経発達表現型や神経回路機能の変化と関連づけられており、NOVA2は神経系生物学におけるRNAプロセシング異常を調べるうえで有用な結節点となる。さらにNOVA2は、ストレス応答性のRNA代謝や細胞種特異的なトランスクリプトーム再編成と交差する、より広範なスプライシング因子の制御回路の一部としても研究されている。

Nova-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NOVA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NOVA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NOVA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NOVA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。