Partículas Lentivirales de Activación (m) Notch1: sc-421930-LAC

Notch1 codifica un receptor transmembrana de paso único que media la señalización canónica de Notch mediante un procesamiento proteolítico dependiente de ligando y la liberación del dominio intracelular de Notch, el cual se transloca al núcleo para regular la transcripción dirigida por CSL/RBPJ. En sistemas murinos, Notch1 es un determinante central de las decisiones de destino celular, del mantenimiento de células madre y progenitoras, y del control dependiente del contexto de la proliferación y la apoptosis en linajes hematopoyéticos, vasculares, neurales y epiteliales. La actividad de Notch1 se integra con vías como Wnt/β-catenina, NF-κB, PI3K–AKT, MAPK y TGF-β para coordinar programas de diferenciación y la homeostasis tisular. La desregulación de la señalización de Notch1 se estudia ampliamente en defectos del desarrollo, en la diferenciación y transformación de células inmunitarias, en el remodelado vascular y en la fisiopatología neurodel desarrollo y epitelial.

Las partículas de activación lentiviral Notch1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Notch1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Notch1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Notch1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Notch1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Notch1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.