Notch 4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400766-ACT

ヒトNOTCH4は、単回膜貫通型受容体であるNotch 4をコードしており、隣接細胞間（juxtacrine）シグナル伝達を介して細胞運命決定、系譜コミットメント、ならびに組織恒常性の維持を制御する。リガンド結合により、プロテアーゼによる切断処理を受けてNotch細胞内ドメイン（NICD）が遊離し、核内へ移行してCSL/RBPJおよび共活性化因子と協調し、増殖と分化を司る転写プログラムを制御する。NOTCH4活性は発生過程や血管関連のプロセスと密接に統合されており、WNT、TGF-β、炎症性シグナルなどの経路と交差して、内皮細胞および免疫細胞の表現型形成に影響を与えうる。Notch 4シグナルの異常は血管新生応答の変化や腫瘍関連微小環境の状態変容と関連づけられており、がん化機構および血管生物学の機構解析研究において重要である。

Notch 4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOTCH4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Notch 4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOTCH4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOTCH4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Notch 4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOTCH4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNotch 4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOTCH4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNotch 4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。