Notch 2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401323-ACT

NOTCH2は、細胞運命の決定、系譜コミットメント、組織恒常性を制御する接触依存性（ジャクスタクリン）シグナル伝達を担う、1回膜貫通型受容体Notch 2をコードします。リガンド（例：JAGGED／Delta-like）が結合すると、タンパク質分解的なプロセシングによりNotch細胞内ドメインが遊離し、CSL/RBPJおよび共活性化因子とともに転写を制御します。また、Wnt、TGF-β、NF-κBなどの経路と統合されます。Notch 2活性は、増殖と分化のバランス、幹／前駆細胞の維持、免疫細胞の発生に影響し、臓器・組織によって文脈依存的な作用を示します。NOTCH2シグナルの異常は発生異常と関連し、がん化や炎症過程への関与も示唆されていることから、分化研究、微小環境シグナル、疾患モデル化における重要な研究対象となっています。

Notch 2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOTCH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Notch 2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOTCH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOTCH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Notch 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOTCH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNotch 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOTCH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNotch 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。