CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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NOS2/iNOS Double Nickaseプラスミド (m): sc-421928-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NOS2/iNOS Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NOS2/iNOSダブルニカースプラスミド（m）およびNOS2/iNOSダブルニカースプラスミド（m2）は、Nos2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: NOS2/iNOS 抗体 (C-11): sc-7271
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NOS2/iNOS Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421928-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NOS2/iNOS Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421928-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのNos2は、炎症反応および自然免疫応答の過程でL-アルギニンから一酸化窒素（NO）を産生する酵素である誘導型一酸化窒素合成酵素（NOS2/iNOS）をコードする。NOS2はNF-κB、JAK/STAT、インターフェロンシグナルなどの経路の下流で転写誘導され、マクロファージの活性化、抗菌防御、ならびに酸化還元依存的な細胞内シグナル伝達の調節に関与する。iNOS活性が持続するとニトロソ化ストレスやタンパク質のS-ニトロシル化を引き起こし、ミトコンドリア機能、DNA損傷応答、アポトーシスに影響を及ぼし得る。Nos2の制御異常は、感染、自己免疫、神経炎症、心血管機能障害、腫瘍関連炎症のモデルで示唆されており、免疫介在性の組織障害の機序研究における重要な結節点となっている。
NOS2/iNOS ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Nos2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Nos2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Nos2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Nos2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。