Nopp140 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402907-NIC

NOLC1は、核小体およびコイルドボディリン酸化タンパク質1（Nopp140）をコードしている。Nopp140は高度にリン酸化された核小体タンパク質で、核小体とカハール小体の間をシャトルしながら、リボソーム生合成およびsmall nucleolar RNP（snoRNP）／small Cajal body–specific RNP（scaRNP）の動態を支えている。Nopp140はrRNAの転写・プロセシング装置の中核要素と相互作用し、核小体の構築（アーキテクチャ）形成にも寄与することから、その機能はRNAポリメラーゼI活性、pre-rRNA成熟、核小体ストレス応答と結び付いている。NOLC1の攪乱は、rRNAプロセシング、核小体の完全性、細胞周期進行を変化させ得るため、増殖制御やストレスシグナル伝達の機序研究において重要である。核小体機能不全は多様な病態生理学的状態に共通する特徴であることから、NOLC1は疾患関連の細胞モデルにおける核小体恒常性のマーカー／制御因子としてもしばしば解析される。

Nopp140 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NOLC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NOLC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NOLC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NOLC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。