NOP17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407256

Panoramica

PIH1D1 codifica NOP17, un co-chaperone conservato all’interno del complesso R2TP, che collabora con HSP90 per promuovere la biogenesi, la stabilizzazione e l’assemblaggio di grandi macchine macromolecolari. NOP17 supporta la maturazione degli snoRNP box C/D, contribuisce alla biogenesi dei ribosomi e all’omeostasi nucleolare, e aiuta ad assemblare complessi chiave come l’RNA polimerasi II e i moduli di segnalazione contenenti PIKK. Attraverso queste funzioni, PIH1D1 collega il controllo qualità mediato da chaperoni all’elaborazione dell’RNA, alla proteostasi e alle vie di risposta allo stress. La disregolazione dell’assemblaggio dipendente da R2TP/HSP90 e della biogenesi delle ribonucleoproteine è stata associata ad alterazioni del controllo della crescita e a fenotipi di mantenimento del genoma rilevanti per la ricerca meccanicistica sulle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NOP17 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIH1D1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIH1D1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIH1D1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NOP17.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIH1D1 per lo studio della segnalazione di NOP17, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PIH1D1 critici per la funzione di NOP17
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIH1D1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NOP17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NOP17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIH1D1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NOP17 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NOP17 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIH1D1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIH1D1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.