Nodal CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401439

概要

NODALは、分泌型のTGF-βスーパーファミリーに属するモルフォゲンであるNodalをコードしており、主にActivin受容体およびSMAD2/3を介してシグナル伝達を行い、初期発生における中胚葉・内胚葉（メセンエンドダーム）の運命決定、左右軸形成、ならびに多能性プログラムの維持を制御します。ヒト細胞では、NodalはLEFTYなどのフィードバック制御因子と統合されるほか、WNTやFGF経路とのクロストークを通じて、系譜選択、上皮間葉転換（EMT）、および幹細胞状態を制御する転写ネットワークの形成に関与します。NODALの異常発現は複数の腫瘍コンテキストで報告されており、浸潤性表現型、細胞可塑性、耐性に関連するシグナル回路との関連から頻繁に研究されています。経路の結節点（ノード）として、Nodalは発生生物学、がん生物学、幹細胞分化モデルにおいて一般的に解析対象となっています。

Nodal CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNODAL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NODAL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NODALのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nodalタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nodalシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NODAL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nodalの機能に不可欠なNODALエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NODALゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nodal CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNodal CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NODAL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nodal HDRプラスミド（h）および Nodal HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNODALホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNODAL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。