Nodal Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401439

Panoramica

NODAL codifica Nodal, un morfogeno secreto appartenente alla superfamiglia del TGF-β che segnala principalmente attraverso i recettori dell’Activina e SMAD2/3, regolando la specificazione del mesendoderma, il patterning sinistra–destra e il mantenimento dei programmi di pluripotenza durante lo sviluppo precoce. Nelle cellule umane, Nodal si integra con regolatori a feedback come LEFTY e con il crosstalk con le vie WNT e FGF per modulare le decisioni di destino cellulare, le transizioni epitelio–mesenchimali e le reti trascrizionali che controllano gli stati delle cellule staminali. Un’espressione aberrante di NODAL è stata riportata in diversi contesti tumorali ed è spesso studiata per la sua associazione con fenotipi invasivi, plasticità cellulare e circuiti di segnalazione legati alla resistenza. In quanto nodo di via, Nodal è comunemente indagato in biologia dello sviluppo, biologia del cancro e modelli di differenziamento delle cellule staminali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nodal (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NODAL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NODAL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NODAL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nodal.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NODAL per lo studio della segnalazione di Nodal, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NODAL critici per la funzione di Nodal
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NODAL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nodal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nodal CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NODAL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nodal Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nodal (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NODAL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NODAL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.