NOD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402402-ACT

NOD1（nucleotide-binding oligomerization domain containing 1）は、細胞質に存在するパターン認識受容体であり、ペプチドグリカン由来のムロペプチド、特にグラム陰性菌に由来するγ-D-グルタミル‐meso-ジアミノピメリン酸を検知します。リガンドを認識すると、NOD1はRIPK2を介してシグナルを伝達し、NF-κBおよびMAPK経路を活性化することで、炎症性メディエーターの転写を促進し、上皮バリア機能や自然免疫応答を形成します。NOD1はさらに、オートファジー、ストレスシグナル、宿主–マイクロバイオーム相互作用とも交差し、細胞生存や免疫恒常性に影響を及ぼします。NOD1活性の制御異常は、慢性炎症状態や感染関連病態と関連づけられており、免疫シグナル伝達ネットワークおよび疾患関連の炎症モデルにおける研究対象として重要視されています。

NOD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NOD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NOD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNOD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNOD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。