NLRC5 Double Nickaseプラスミド (m): sc-436677-NIC

Nlrc5はNLRC5をコードしており、NLRC5はNLRファミリーに属する細胞質センサーで、H2-K/H2-D、β2ミクログロブリン、および抗原プロセシング関連因子の発現を促進することで、MHCクラスI抗原提示の主要な転写制御因子として機能します。NLRC5はインターフェロン経路下流の自然免疫シグナル伝達ネットワークとも交差し、炎症性の転写プログラムを調節し得ることから、病原体認識を獲得免疫のプライミングへと結び付けます。マウス系では、Nlrc5活性の変化が免疫監視、感染感受性、ならびに腫瘍—免疫相互作用の制御の変化と関連することが示されています。これらの特性により、NLRC5は、関連する細胞モデルにおける抗原提示ダイナミクス、免疫回避機構、そしてインターフェロン駆動性遺伝子発現を解析するための有用な結節点となります。

NLRC5 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Nlrc5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Nlrc5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Nlrc5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Nlrc5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。